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脂質(zhì)過(guò)氧化探針C11-BODIPY 581/591

簡(jiǎn)要描述:本產(chǎn)品是一種新型的對(duì) Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過(guò)氧化探針,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜中的脂質(zhì)過(guò)氧化(Lipid ROS)進(jìn)行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會(huì)離開(kāi)脂質(zhì)膜,該過(guò)程同時(shí)伴隨熒光信號(hào)變化。

  • 產(chǎn)品型號(hào):
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷(xiāo)商
  • 更新時(shí)間:2024-07-17
  • 訪  問(wèn)  量:1843

詳細(xì)介紹

品牌BIOHUB分子量504
貨號(hào)78EA10007供貨周期一周
應(yīng)用領(lǐng)域化工

產(chǎn)品描述
一、 化學(xué)結(jié)構(gòu):

二、 檢測(cè)原理:
本產(chǎn)品是一種新型的對(duì) Lipid ROS 高選擇性、高靈敏的脂質(zhì)過(guò)氧化探針,與其他 ROS 捕獲探針不同之處在于,具有好的親脂性可以快速入膜,隨后可以選擇性的對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞膜中的脂質(zhì)過(guò)氧化(Lipid ROS)進(jìn)行捕獲,并在氧化后仍保持親脂性,不會(huì)離開(kāi)脂質(zhì)膜,該過(guò)程同時(shí)伴隨熒光信號(hào)變化。多用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞分析等對(duì) Lipid ROS 的可視化監(jiān)測(cè)。本產(chǎn)品 結(jié)構(gòu)中多不飽和丁間二烯基在 Lipid ROS 催化氧化后,其熒光發(fā)射峰從 590 nm偏移至 510 nm。


實(shí)驗(yàn)步驟

1. 樣品溶解:

商品開(kāi)封后,離心機(jī)輕甩;隨后加入適量 DMSO 進(jìn)行溶解,溶解度至少可達(dá) 25mg/mL。溶解后建議分裝-20℃避光保存,盡量避免反復(fù)凍融,防止吸潮。

【注】:樣品輕甩目的是為了避免痕量的探針吸附管壁損失樣本。

2. 樣品使用:

1流式細(xì)胞分析:

懸浮細(xì)胞:800 g 離心 5 min 收集細(xì)胞沉淀;隨后 PBS 洗滌細(xì)胞兩遍。

貼壁細(xì)胞:棄培養(yǎng)液,用常溫 PBS 或培養(yǎng)液輕洗細(xì)胞 2 次,隨后消化,800g 離心 5 min 收集細(xì)胞沉淀,隨后 PBS 洗滌細(xì)胞兩遍,每個(gè)樣本收集 1~5 ×105 個(gè)細(xì)胞。(注意:操作過(guò)程中輕柔吹打細(xì)胞, 消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),劇烈吹打或消化過(guò)度會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果)

本產(chǎn)品 用于脂質(zhì)過(guò)氧化檢測(cè)的推薦濃度為終濃度 5μM;配制方法:用新鮮空白培養(yǎng)液配制終濃度為 5μM 本產(chǎn)品染色液待用,DMSO 含量5‰。

(注意:該步操作建議在消化細(xì)胞前準(zhǔn)備好,以免細(xì)胞消化后久置影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果)

將事先配置好的脂質(zhì)過(guò)氧化染色液加入收集的細(xì)胞沉淀中,推薦體積為 500μL,隨后置于 37℃孵箱, 染色 30min,期間 5-10min 間隔輕彈細(xì)胞使其懸浮保證染色更充分。

染色結(jié)束后,800 g 離心 5 min,棄上清,隨后用PBS 清洗細(xì)胞 2 次,加入 200μLPBS 重懸細(xì)胞用于流式分析。

2) 原位成像:

接種適當(dāng)密度的細(xì)胞于 20mm 規(guī)格的蓋玻片上也可用共聚焦小皿替代,給予實(shí)驗(yàn)藥物處理適當(dāng)時(shí)間后,吸去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌細(xì)胞一遍加入 500 μL 配制好的脂質(zhì)過(guò)氧化染色液,于 37℃染色 30min;(配制方法參考流式分析中的染色液配制)棄培養(yǎng)液,PBS 洗滌細(xì)胞兩遍后熒光顯微鏡或激光共聚焦下進(jìn)行成像檢測(cè)。細(xì)胞在染色后應(yīng)在 1 h 之內(nèi)完成檢測(cè)。

 

3)檢測(cè)條件:該分子探針在還原狀態(tài)下最佳激發(fā)波長(zhǎng)為 581 nm, 發(fā)射為 591nm;被 Lipid ROS 氧化后最佳激發(fā)波長(zhǎng)為 500 nm,發(fā)射在 510nm。因此,在流式分析中檢測(cè)通道為 FL1-A;激光共聚焦檢測(cè):氧化態(tài)激發(fā)波長(zhǎng)可488nmFITC)通道;還原態(tài)激發(fā)波長(zhǎng)可選 561 nmTRITC)通道。

 

實(shí)驗(yàn)案例分析流式分析實(shí)驗(yàn)范例:使用本試劑檢測(cè) 10 μM RSL3(鐵死亡經(jīng)典誘導(dǎo)劑)處理 A549 細(xì)胞 24 h 后的細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化水平的流式檢測(cè) 

原位成像實(shí)驗(yàn)范例:

下圖為 RSL310 μM)處理A549 細(xì)胞 24 h 后,使用本試劑(5μM)對(duì)活細(xì)胞中脂質(zhì)過(guò)氧化水平進(jìn)行原位染色后激光共聚焦成像結(jié)果。

 

 

 

 

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