mRNA Cap 2′-O-甲基轉(zhuǎn)移酶（50U/μL）說明書

產(chǎn)品描述

mRNA Cap2氧甲基轉(zhuǎn)移酶（mRNA Cap 2′-O-Methyltransferase）是一種來自于牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在RNA的5′末端緊挨帽結(jié)構(gòu)的第一個(gè)核苷酸的2′-O位置處添加一個(gè)甲基基團(tuán)。該酶利用SAM作為甲基供體來甲基化加帽RNA，從而形成Cap1結(jié)構(gòu)。Cap1結(jié)構(gòu)能增強(qiáng)mRNA的翻譯效率，因此可有助于改善mRNA轉(zhuǎn)染和顯微注射實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)。該酶需要有m7GpppN即7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)的RNA作為底物。

產(chǎn)品性質(zhì)來源：攜帶牛痘病毒2'-O-甲基轉(zhuǎn)移酶基因的E. coli分子量：82 kDa純度：≥95%比活：50 U/μL比活單位定義：在 37℃下1 h內(nèi)將10 pmol 80 nt 的帶帽RNA轉(zhuǎn)錄物甲基化所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位存儲(chǔ)緩沖液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% TritonX-100，50%甘油，pH 8.0 產(chǎn)品組分

產(chǎn)品應(yīng)用【Uncapped RNA 一步加帽法 】適用于10 μg以內(nèi) uncapped RNA（≥100 nt）的加帽反應(yīng)，反應(yīng)體系20 μL，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。1. 取10 μg RNA，用RNase free water將適量RNA稀釋至14 μL；2. 將RNA置于65℃加熱5 min，結(jié)束后冰上放置5 min；3. 按照右側(cè)表格依次加入各組分；4. 37℃反應(yīng)60 min；5. RNA加帽完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

【 Cap 0-RNA 的甲基化反應(yīng) 】適用于10 μg以內(nèi) Cap 0-RNA（≥100 nt）的甲基化反應(yīng)，反應(yīng)體系20 μL，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。1. 用RNase Free Water將適量RNA稀釋至15 μL；2. 將RNA置于65℃加熱5 min，結(jié)束后冰上放置5 min；3. 按照右側(cè)表格依次加入各組分；4. 37℃孵育60 min；5. RNA加帽完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)： （1）用于加帽反應(yīng)的RNA在使用前應(yīng)進(jìn)行純化并溶解于RNase free water 。溶液中不能含有EDTA和鹽。（2）加帽酶反應(yīng)前加熱RNA可以去除轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物5′的二級結(jié)構(gòu)。如果轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的5′端結(jié)構(gòu)復(fù)雜，可將加熱時(shí)間延長至10 min。（3）如果轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的5′端結(jié)構(gòu)復(fù)雜，為提高加帽效率可將反應(yīng)時(shí)間延長至120 min。（4）SAM在室溫下會(huì)逐漸降解，SAM降解會(huì)導(dǎo)致N 7 甲基化效率降低，會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致加帽失敗，因此需始終放置在冰上。此外，也可以通過體系優(yōu)化適當(dāng)提高用量以保證加帽反應(yīng)順利進(jìn)行。 其他用途可參考上述用途或相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 運(yùn)輸和保存方法

運(yùn)輸條件：藍(lán)冰/干冰運(yùn)輸

保存溫度：-20℃以下保存

避免反復(fù)凍融或頻繁暴露于溫度變化中，shou次使用時(shí)建議進(jìn)行分裝。

產(chǎn)品效期：12個(gè)月

注意事項(xiàng)

1. 使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存；

2. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；

3. 產(chǎn)品僅供研究使用